Изготовление клеток для кур бройлеров

Изготовление клеток для кур бройлеров

Изготовление клеток для кур бройлеров

Изготовление клеток для кур бройлеров

Изготовление клеток для кур бройлеров

Болезнь Марека

Болезнь Марека (нейролимфаматоз, паралич птиц, энзоотический энцефаломие­лит, БМ) — высококонтагиозная вирусная болезнь кур и индеек, сопровождающая­ся образованием лимфоидных опухолей в различных органах и тканях, поражением седалищных нервов, пояснично-крестцовых и плечевых сплетений, реже блуждаю­щего, симпатических и межреберных нервов, сероватым окрашиванием радужной оболочки и деформацией зрачка. Первые сведения о болезни были опубликованы венгерским ученым Мареком Дж. в 1907 году.

Экономический ущерб от заболевания обусловлен повышенным отходом птиц, снижением их продуктивности, дополнительными расходами на ветеринарно-санитарные мероприятия. Считается, что курица, контаминированная вирусом Болезни Марека , за период яйцекладки недодает 16-10 яиц. Больная птица до гибели успевает снести 50, максимум 110 яиц.

Этиология. Возбудитель заболевания ДНК-содержащий вирус, относящийся к подсемейству Gammaherpesviridae, семейства Herpesviridae, куда входит герпесвирус беличьих и паукообразных обезьян. Величина зрелых вирусных частиц (вирионов) 130-150 нм в диаметре. Они состоят из содержащего ДНК нуклеотида величиной 60-90 нм, окруженного белковой оболочкой (капсидом), объединенных в структуру называемую нуклеокапсидом и имеющую диаметр 85-100 нм. Нуклеокапсид окружен наружной суперкапсидной оболочкой, имеет форму икосаэдра, обладает кубическим типом симметрии. Капсид образован 162 полыми капсомерами, имеющими форму ци­линдра. Длина капсомеров 9-12 нм, ширина 8 нм, расстояние между центрами капсомеров 13 нм. Диаметр полости капсомера 3 нм.

Вирус болезни Марека, особенно клеточносвязанный, устойчив во внешней среде и может не терять жизнеспособности, находясь в помете, на поверхности инфицированных яиц, в эпителии перьевых фолликулов 200-300 дней. В инфицированной подстил­ке, при комнатной температуре вирус болезни Марека сохраняет патогенные свойства более 16 недель.

В органах цыплят антиген вируса БМ методом ИФА можно выявить в сыворот­ке крови через 72 часа после заражения, в селезенке через 7 дней, в почках и печени через 14 дней, в коже, периферических нервах, сердце, легких и перьевых фоллику­лах через 21 день, в головном мозге через 35 дней, в мышечной ткани через 63 дня. Указанным методом вирус можно определить в организме цыплят в течение 4-5 ме­сяцев после заражения.

Вирус БМ в организме птиц персистирует главным образом в Т-лимфоцитах. Лимфомы при Болезни Марека Т-клеточного происхождения, в отличие от В-клеточных лимфом лейкоза и ретикулоэндотелиоза, что позволяет их дифференцировать с помо­щью иммуноцитохимических методов с использованием анти Т-В-моноклональных антител.

В лабораторных условиях вирус культивируется в куриных эмбрионах, культу­ре клеток фибробластов и почек куриных, перепелиных, индюшиных и утиных эм­брионов, а некоторые штаммы в первичной культуре клеток почек хомяка и морской свинки.

Из 6 выявленных у вируса болезни Марека антигенов наиболее важны А, В и С антигены. Наличие А-антигена характерно для всех эпизоотических штаммов. В оболочке кле­ток, формирующих лимфому, выявлен специфический опухолевый антиген.

Патогенные штаммы вируса считаются родственными в антигенном отношении.

В организме птиц вирус болезни Марека индуцирует выработку специфических преципитирующих и нейтрализующих вирус антител. Гемагглютинирующими свойствами ви­рус не обладает.

Выделенные вирусы болезни Марека подразделены на 3 серотипа:

1  серотип объединяет патогенные (или онкогенные) вирусы болезни Марека и аттенуированные штаммы этих вирусов;

2  серотип включает естественно аттенуированные штаммы вируса БМ;

3   серотип — герпес вирус индеек.

Для серотипирования новых штаммов вируса БМ наиболее эффективен флуо­ресцентный метод с использованием моноклональных антител, специфичных к суще­ствующим серотипам.

С момента первой регистрации БМ и до 50-х годов, в период, совпадающий с на­чалом широкого изучения болезни 1940-1960 гг. вспышки БМ были спорадически­ми, болезнь протекала в легкой, «классической» форме, в основном с поражениями нервов, нервных стволов и их сплетений. Во второй половине 60-х годов стали выде­лять вирулентные штаммы вируса БМ, которые, наряду с поражениями нервной сис­темы, вызывали образования лимфом во внутренних органах. Такой вариант прояв­ления болезни Марека стали называть «острой формой БМ», смертность птиц достигала 60% среди кур яичного направления и до 10% у бройлеров. Острую форму БМ, вызывае­мую вирулентными штаммами, успешно профилактировали вакциной из штамма HVT (герпес вируса индеек). В конце 70-х годов потери от БМ среди вакцинирован­ных птиц стали возрастать, что было обусловлено появлением высоковирулентных штаммов вируса БМ. Была разработана и позволила стабилизировать обстановку би­валентная вакцина из штаммов SB-1 и HVT(FC-126). В начале 90-х годов снова ста­ли возрастать потери от БМ среди вакцинированных птиц. Несколько улучшить эпи­зоотическую ситуацию в те годы удалось с помощью вакцины из штаммов 1 серотипа CVI 1988 («Rispens»).

Вирус болезни Марека встречается повсеместно среди птиц как яичного, так и мясного на­правления и полное искоренение болезни практически невозможно, потому что ви­рус постоянно персистирует в цыплятах, очень устойчив во внешней среде и легко передается восприимчивым птицам. Применение вакцин — достаточно эффективное средство борьбы с болезнью Марека, но использование живых вакцин может способствовать воз­никновению более вирулентных штаммов вируса БМ. Повышение вирулентности вируса болезни Марека основано на конкуренции двух штаммов вируса (вакцинного и полевого) за одну клеточную мишень. Заражение полевым штаммом вируса БМ цыплят пред­шествует развитию поствакцинального иммунитета. В такой ситуации внутри орга­низма полевой штамм вируса подвергается интенсивному воздействию иммунной системы. В результате такого взаимодействия появляются высоковирулентные фор­мы вируса БМ. Существует прямая зависимость между применением новых вакцин и возникновением новых высоковирулентных штаммов вируса БМ. При существую­щей системе профилактики БМ живыми вакцинами, основываясь на эпизоотологи­ческой истории развития БМ, можно предположить, что прогрессирование виру­лентности полевых штаммов вируса БМ будет продолжаться и в дальнейшем.

В последние годы изолированы участки генома цыплят, ответственные за рези­стентность к болезни Марека. Идентификацией вовлекаемых в патологию генов и определением механизма их действия можно определить значимость врожденного и приобретенно­го иммунных ответов в сдерживании реализации вирулентных свойств вируса болезни Марека.

Маркеры, распознанные таким образом, в будущем можно использовать для селек­ции и выведения пород птиц устойчивых к болезни Марека.

Эпизоотология. Наиболее чувствительны к заражению вирусом БМ цыплята сразу после вывода. С возрастом устойчивость птиц к инфекции повышается. Вос­приимчивыми к заражению вирусом БМ считаются индейки, перепела, фазаны, це­сарки, утки, лебеди, куропатки и некоторые другие виды птиц, которые могут быть вирусоносителями и источником инфекции. В естественных условиях вирус выделен от индеек, перепелов, ворон, хохлатой майны и других птиц. Серологическими ис­следованиями антитела к вирусу герпеса индеек устанавливают в сыворотке крови уток и индеек у 50-72% исследованных птиц, антитела к вирусу БМ у 21% обследо­ванных голубей. У млекопитающих животных, в том числе у КРС, лошадей, овец, белых крыс, морских свиной носительство вируса БМ не отмечено.

Источником инфекции являются больные и переболевшие птицы. Последние в течение 16-14 месяцев после заражения (и не исключено, что пожизненно) явля­ются вирусоносителями. В неблагополучных по болезни Марека хозяйствах количество птиц вирусоносителей может составлять 10-98%. В природных условиях количество вирусо- носителей иногда достигает 60-70% от числа обследованных птиц. Основной путь передачи возбудителя: аэрогенный, с частицами пыли, содержащими эпителиаль­ные клетки перьевых фолликулов, в которых находится вирус. Способность вируса сохраняться на поверхности яиц часто становится причиной перезаражения цыплят в инкубаторе. Допускается возможность передачи вируса с продуктами убоя птиц. Возможен перенос вируса БМ клещами из рода Argas Persicus и жуком-жернотелкой. Наиболее чувствительны к заражению цыплята первых дней жизни, особенно породы леггорн, белый плимутрок, хайсекс белый линии Д. Птицы породы корниш и коричневый леггорн считаются более устойчивыми.

Среди индеек, во Франции и Израиле, были вспышки БМ с формированием лимфоидных опухолей во внутренних органах. В США в промышленных стадах ин­деек подобная случаи не отмечены. Вирус БМ, изолированный при вспышках болез­ни среди индеек, не встречается среди цыплят. Но предполагается, что высоковиру­лентный вирус БМ, выделенный от индеек, все-таки передается им от цыплят, но при этом формируется новый высоковирулентный рекомбинантный штамм.

Быстрому распространению инфекции способствует высокая концентрация птиц, особенно при клеточном содержании.

Клинические признаки. Развитие инфекции у цыплят при болезни Марека подразделяется на три типа. При первом вирус проходит полный репродуктивный цикл развития в эпителии перьевых фолликулов цыплят, с образованием вирусной суперкапсидной оболочки и формированием вирулентного вириона. Неполный цикл развития вируса отмечается в некоторых лимфоидных и эпителиоидных клетках цыплят, а также в культурах клеток. При этом формируется неполноценный, без суперкапсидной оболочки, вирион (антиген), который не является инфекционным.

Второй тип представляет латентная инфекция, преобладающая в Т-клетках, при ко­торой вирусный геном не экспрессируется, Предполагается, что латентная инфекция при болезни Марека является причиной образования опухолей во внутренних органах цыплят.

Третьим типом является трансформированная инфекция, которая встречается только в Т-лимфоцитах, а возбудителем бывает исключительно вирулентный штамм вируса БМ. При трансформированной инфекции происходит ограниченная экспрес­сия генома вируса БМ. Зараженные вирусом БМ цыплята в дальнейшем становятся вирусоносителями и вирусовыделителями (источником инфекции).

Клиническое проявление БМ у цыплят зависит от формы заболевания. Различа­ют «классическую» и острую формы болезни. Классической форме характерны по­ражения периферической и центральной нервной систем с многообразием возмож­ных симптомов, в зависимости от того, какой нерв поражен. Может наблюдаться хромота, пареза и параличи конечностей, хвоста, шеи. Встречается изменение фор­мы и размеров зрачка, цвета радужной оболочки («сероглазие»). Смертность при классической форме составляет 3-7%, но может достигать 30%. Повышенный отход птиц наблюдается в 3-5-месячном возрасте. В случае преобладания поражения орга­нов зрения смертность менее выражена, но значительны потери от снижения продук­тивности птиц.

Острая форма БМ сопровождается образованием лимфоидных опухолей в различных органах и тканях. Продолжительность инкубационного периода от 2 недель до 2-5 месяцев. Симптомы поражения нервной системы при острой форме встречаются редко, но у цыплят 1-2-месячного возраста возможно массовое, крат­ковременное проявление «нервных» признаков заболевания в виде парезов и пара­личей, встречающихся в начальной стадии болезни. При этом в течение 5-7 дней переболевает большинство цыплят, затем признаки поражения нервной системы не проявляются. Через 3-6 недель после этого значительно возрастает отход птиц с преобладанием опухолевых поражений внутренних органов. Острая форма про­является у птиц 4-12-недельного возраста, но возможны вспышки заболевания у 33-70-недельных птиц.

Реже у цыплят встречается типичная «кожная» форма БМ с поражениями перьевых фолликулов и формированием в коже опухолей. Кожная форма может со­путствовать как острому, так и хроническому течению болезни.

У индеек в начале болезни отмечается неспецифичные симптомы в виде: сниже­ния живой массы, вплоть до истощения, дегидратации (сухости кожи), диареи, в не­которых случаях хромоты и параличей. В некоторых популяциях в возрасте между 12 и 30 неделями клиническое проявление БМ и смертность индеек достигают 80-100%.

Вирус БМ у птиц первоначально поражает В-лимфоциты, секретирующие ан­титела, а затем подавляется функция иммунорегуляторов и Т-киллеров. На ранней, острой стадии болезни отмечается лизис и гибель инфицированных Т- и В- лимфоци­тов и развивается иммунодепрессия. Некоторые, высоковирулентные штаммы почти полностью разрушают лимфоидную ткань тимуса, вызывая гибель 25% птиц в течение 2 недель болезни. Обычно, в среднем через неделю после начала развития инфек­ции, болезнь переходит в латентную стадию, вирус персистирует в Т-лимфоцитах в те­чение всей жизни птицы. Иногда происходит злокачественная трансформация Т-лимфоцитов, что завершается развитием невральных поражений с признаками параличей, что соответствует «классической» форме БМ или формируются лимфомы во внутрен­них органах, в том числе в яичниках и семенниках, надпочечниках, почках. С другой стороны, предполагают, что онкогенные штаммы вируса БМ инициируют злокачественную трансформацию некоторых Т-клеток до наступления латентного периода бо­лезни. В дальнейшем эти Т-клетки нечувствительны к регулирующему влиянию им­мунной системы. В лимфомах преобладают Т-хелперы, экспрессирующие на своей поверхности гликопротеин CD4. Материнские антитела значительно защищают цып­лят от полевого вируса БМ, давая возможность иммунной системе цыпленка активи­зировать клеточный иммунный ответ. Но при высоком уровне родительских антител имеется возможность нейтрализации ими не только полевого, но и вакцинного штам­ма вируса БМ. Считается, что при БМ наибольшее значение имеет клеточный имму­нитет, который снижает способность вируса к распространению, способствует удер­живанию инфекции в латентной стадии. С помощью клеточного иммунитета происходит распознавание и разрушение клеток, активированных вирусом БМ, а так­же распознавание и разрушение любых трансформированных вирусом предопухолевых клеток. Клеточный иммунитет подразделяют на «врожденный» и «приобретен­ный». В начале развития болезни наиболее важны факторы врожденного иммунитета макрофаги и NK-клетки (естественные киллеры). Для проявления активности факто­ров приобретенного иммунитета необходимо несколько дней. NK-клетки имеют боль­шое значение у линий цыплят, генетически устойчивых к БМ, у которых развитие лимфом происходит только при заражении высоко вирулентными штаммами вируса БМ. При заражении вирусом БМ генетически устойчивых цыплят активность NI< сильно возрастает, в противоположность — при заражении тем же вирусом цыплят чувствительных к БМ активность NK резко снижается. При реализации клеточного иммунитета цитотоксические Т-лимфоциты вызывают гибель инфицированных кле­ток, Т-хелперы оказывают свое действие при непосредственном контакте или по­средством цитокинов, способных подавлять внутриклеточные формы возбудителя и а также активизировать цитотоксические лимфоциты и механизмы врожденного иммунитета. Активизацией различных цитокинов Т-клетки способны усиливать антителопродукцию В-лимфоцитами. Как при БМ, так и при вакцинации в формирование иммуннного ответа вовлекаются как цитотоксические лимфоциты, так и Т-хелперы. Цитотоксические лимфоциты особенно важны для снижения ранней литической ин­фекции, а также для разрушения клеток реактивированных вирусом БМ. Цитокины Т-хелперов необходимы для сдерживания инфекции в латентной стадии. Одним из та­ких цитокинов является интерферон-q, имеется еще подобный, но пока не идентифи­цированный цитокин, получивший наименование «фактор, сдерживающий инфек­цию в латентной форме».

Существуют и многие другие механизмы реализации иммунной защиты при БМ.

Патоморфология. Патологоанатомические изменения при классической форме проявляются очаговыми или диффузными утолщениями плечевого и пояснично-крестцового нервных сплетений, нервных стволов, седалищных нервов. Последние мо­гут быть утолщены в 1,5-3 раза, изредка с наличием одиночных или множественных узелков различной величины, которые иногда в 3-4 раза толще самого нерва. Окра­ска нервов бывает серой или серовато-желтой, а сами нервы местами размягчены. Частота обнаружения опухолей во внутренних органах при классической форме не­значительна. При гистологическом исследовании нервов отмечается отек, дегенера­ция нервных волокон и миелиновой оболочки, размножение швановской оболочки, распад нервных волокон, очаговая или диффузная инфильтрация нервов лимфоидными клетками, среди которых могут встречаться плазматические клетки и другие. В зависимости от клеточного состава инфильтрата различают изменения воспали­тельного либо неопластического характера, но, видимо, сосуществуют оба типа пора­жения нервов, а степень их проявления зависит от стадии При гистологическом исследовании опухолевых образований находят неопла­стические, воспалительные и иммунологически активные клетки, в том числе лимфо­циты, плазматические клетки и гистиоциты, Т- и В- клетки с превалированием по­следних. Преобладают мелкие лимфоидные клетки с компактным ядром и узкой полосой цитоплазмы. Неоплазмы начинают формироваться в периваскулярной тка­ни различных органов. Появляются небольшие пролифераты из примитивных кле­ток. Затем они дифференцируются в лимфоидные, гистоцитарные и плазматические клетки. Очаги из новообразованных клеток увеличиваются в размере, сливаются в обширные участки, а паренхима и строма органов постепенно замещается опухоле­выми клетками. Степень поражения может быть такова, что в органе под микроско­пом можно выявить лишь отдельные характерные органу структуры или таковые во­все не сохраняются.

Клеточный состав опухолевой ткани зависит от степени дифференцировки опу­холевых клеток. Поэтому иногда принято различать три типа лимфом:

—  лимфатические лимфомы, состоящие преимущественно из лимфоцитов малой, а также средней и крупной величины (лимфобластов), при этом опухолевая ткань мо­жет быть сформирована в основном из одного вида указанных лимфоцитов с единич­ными базофильными родоначальными клетками — мономорфный клеточный состав, или состоять из всех указанных клеток — гетероморфный клеточный состав;

—   гистицитарно-плазматические лимфомы, сформированные незрелыми и зре­лыми гистицитами, ретикулярными и плазматическими клетками, среди которых встречаются единичные лимфоциты и фибробластические клетки (гетероморфный клеточный состав);

—   смешанно-клеточные лимфомы, состоящие из лимфатических, гистиоцитарных, плазматических, ретикулярных, гранулоцитарных и фибробластических клеток на различной стадии дифференцировки.

—     Чаще встречаются смешанно-клеточные лимфомы, значительно реже лимфатиче­ские, и совсем редко гистиоцитарно-плазматические.

—     Ранее всего при БМ поражаются тимус и фабрициева сумка. Фабрициева сумка может быть уменьшена в размере или атрофирована, в отдельных случаях в ней встречаются неоплазмы. Лимфоидные фолликулы фабрициевой сумки атрофируют­ся, а на их месте формируются кистозные полости. При этом межфолликулярные соединительнотканные перегородки несколько утолщены и инфильтрированы лимфоидными клетками. В некоторых случаях (от 2 до 10) отмечается развитие в фабрициевой сумке неоплазмы с последующей атрофией характерных органу структур. В начале опухолевые очаги формируются периваскулярно в межфолликулярных соединительнотканных перегородках в одной или в нескольких складках слизистой оболоч­ки. Затем при росте опухолевых очагов лимфоидные фолликулы атрофируются или инфильтрируются опухолевым пролифератом и сливаются (замещаются) неопласти­ческой тканью. Но наиболее частым вариантом изменений в фабрициевой сумке яв­ляется гипоплазия, вплоть до атрофии лимфоидных фолликулов и образование на их месте крупных — в 1,5-3 раза больше размеров непораженных фолликулов — кистозных полостей.

—     Диагностика. Диагноз на БМ ставится с учетом эпизоотологических данных, ре­зультатов вскрытия трупов птиц и гистологических исследований пораженных внутренних органов, ретроспективных серологических исследований, выделении вируса на куриных эмбрионах, в культуре клеток фибробластов эмбрионов кур или на дру­гих чувствительных биологических моделях с последующей идентификацией в РДП, ИФА, МФА, ПЦР или путем электронномикроскопических исследований и поста­новкой биопробы на цыплятах.

При заражении на ХАО 11-12-дневных эмбрионов кур патологическим материа­лом от больных птиц на 7-8 день по всей поверхности хориоаллантоисной «мембраны» появляются очаги клеточной пролиферации («пустулы») диаметром 0,5-3 мм. У эмбрионов также находят поражения печени и спленомегалию.

Антиген вируса БМ в перьевых фолликулах выявляют в прямой реакции МФА или в РДП, что в определенной степени можно использовать для дифференциальной диагностики БМ и лимфоидного лейкоза.

Вирусы лейкоза и ретикулоэндотелиоза птиц в клетках мишенях интегрируют с (с) one геном, что приводит к экспрессии гена с-тус, инициирующего лимфогенные процессы. Эти изменения, происходящие на молекулярном уровне, могут использовать­ся для окончательного или дифференциального диагноза на лейкоз, ретикулоэндотелиоз и БМ на основании определения состава ДНК опухоли. Использование таких проб, как pRAV-2, pSNV, c-myc и анализа гибридизации ДНК опухоли, позволяет выявить клональные включения провирусов вирусов лейкоза и ретикулоэндотелиоза и измене­ния участка с-тус. На основании этого с помощью ПЦР дифференцируют лимфомы БМ, лейкоза и ретикулоэндотелиоза.

Биопробу проводят на суточных цыплятах. Результаты биопробы оценивают че­рез 2 недели по наличию вирусспецифического антигена в перьевых фолликулах и характеру гистологических изменений во внутренних органах; через 4-6 недель — опухолей во внутренних органах и нервах; через 8 недель — выявлении специфиче­ских антител к вирусу БМ.

Вирулентность штамма вируса БМ, выделенного в хозяйстве, устанавливают комплексно, поскольку определить ее только с помощью серологических методик, в том числе на молекулярном уровне, не удается. Степень вирулентности штаммов

—                 серотипа определяют на цыплятах. Для этого Составляется несколько групп из ге­нетически чувствительных и генетически устойчивых к БМ птиц. Цыплят иммунизи­руют вакцинами 1 серотипа (e.g. CVI 988), FC-126 (ВГИ) и FC-126+SB-1 (или 30 1В). Часть групп заражают вновь выделенным штаммом и такое же количе­ство групп штаммом вируса с известной вирулентностью.

У генетически чувствитель­ных цыплят, высоковирулентный вирус (VV) вызывает болезнь в группе цыплят, вакцинированных РС-126(ВГИ), но в группах, вакцинированных CVI 988 или бива­лентной вакциной, БМ не проявляется. Генетически устойчивые цыплята, вакцини­рованные FC-126 (ВГИ), при заражении высоковирулентным штаммом (VV) не за­болевают БМ. Заключение о степени вирулентности выделенного вируса БМ делается по экспериментальному сравнению его вирулентности и вирулентности референс-(УУ) штамма.

Лечение и профилактика. Профилактика БМ основана на строгом соблюдении правил санитарно-гигиенических мероприятий, изолированном выращивании цып­лят от птиц других возрастов, сведении до минимума возможности одновременного заражения цыплят вирусами БМ и лейкозо-саркомной группы.

Для специфической профилактики БМ используют различные вакцины:

  1. Живые вакцины из аттенуированных онкогенных штаммов 1 серотипа вируса БМ (штаммы HPRS-B16, Md-5, JV и JA), которые не проходят полный цикл разви­тия в перьевых фолликулах птиц, поэтому нет опасности их реверсии в патогенные варианты. Горизонтально данные штаммы не распространяются.
  2. Вакцины из частично аттенуированного вируса БМ 1 серотипа — CVI-988 («Rispens»), который проходит полный цикл репликации в организме цыплят, рас­пространяется во внешней среде и обладает остаточной патогенностью для восприим­чивых птиц.
  3. Вакцины из природно-ослабленных (полевых) неонкогенных вирусов БМ

2  серотипа (штаммы SB-1, 301В). Данные вакцинные штаммы хорошо размножают­ся в организме птиц, зрелые формы вирионов выделяются во внешнюю среду и рас­пространяются среди птиц горизонтально.

Вакцины из авирулентного вируса герпеса индеек (ВГИ) 3 серотипа (штаммы FC-126, PBT11V1). Данные вирусы не нуждаются в аттенуации, возможность ревер­сии иатогенности

  1. отсутствует. Штамм FC-126 может быть стабилизирован во внекле­точном состоянии, в том числе лиофильно высушен. Но если вакцины из штамма FC-126 готовятся из клеточно не связанного вируса, то они более чувствительны к ро­дительским антителам. В вакцинах, содержащих клеточносвязанный вакцинный ви­рус нейтрализуются родительскими антителами только в присутствии комплемента.
    1. Поливалентные (двух- и трехвалентные) вакцины, изготовленные из различ­ных штаммов вируса БМ и ВГИ, которые бывают эффективны при энзоотических вспышках БМ, обусловленных заражением птиц высоковирулентными полевыми штаммами. Из двухвалентных вакцин, по иммуногенной активности, пока наиболее удачны сочетания штаммов 2 и 3 серотипов, например SB-1 и FC-126 или 301 В/1 и HVT. Меньший уровень синергизма в вакцинах из штаммов 1 и 3 или 1 и 2 сероти­пов. В организме птиц протективный синергизм проявляется в возрастании имунногенной эффективности одного штамма даже при добавлении небольшого количества другого штамма.
    2. Инактивированные вакцины готовятся из цельного вируса без нуклеиновой кислоты, но содержащего протеины-носители антигена вируса БМ. В промышлен­ном птицеводстве признания пока не получили.
    3. Рекомбининтные вирусные вакцины разработаны, апробированы, но массово­го применения пока не находят.

Один из критериев, который надо учитывать при подборе вакцины для конкрет­ного хозяйства — это определение вирулентности циркулирующего в нем вируса БМ. Если в хозяйстве персистирует штамм вируса БМ высоковирулентный + (VV+), то целесообразно применение трехвалентных вакцин, содержащих все 3 серотипа вакцинных штаммов вируса БМ. В остальных случаях можно использовать моно- или бивалентные вакцины.

Эффективность вакцины зависит не только от количества содержащихся в них бляшкообразующих единиц (титр вируса, определяемый в культуре клеток), но и от способности вируса

приживаться в организме цыпленка, потому что только при ус­ловии репликации вируса формируется напряженный клеточный иммунитет против БМ. Для выяснения, реплицируется ли вакцинный вирус в организме цыпленка, на 3-10 день после вакцинации проводят его выделение. Отсутствие вакцинного вируса в изолятах указывает на недостаточную эффективность вакцинации.

При выборе вакцины для хозяйства яичного направления важно знать степень инфицированности цыплят вирусом лейкоза. При обнаружении у птиц вируса лейко­за нежелательно использование в данном хозяйстве вакцин из штаммов 2 серотипа, потому что последний может провоцировать лейкоз. Если птица свободна от вируса лейкоза, то ее можно успешно вакцинировать вакцинами, содержащими штаммы 2 серотипа.

Большинство вакцин против БМ нарабатывается с использованием вакцинного штамма вируса, накопленного в культуре клеток птиц. Были успешные попытки культивирования вакцинных штаммов в органной культуре тканей птиц, в куль­турах клеток млекопитающих, рыб, амфибий, рептилий, но большинство подоб­ных исследований завершилось на экспериментальной стадии.

Вакцины против БМ преимущественно живые, жидкие, хранятся в жидком азо­те. Выпускаются и сухие вакцины из штамма ВГИ. Вакцинируют цыплят сразу по­сле вывода, обычно внутримышечно, значительно реже подкожно. Последний метод введения вакцины, в ряде случаев, не очень эффективен. Вакцину «Rispens» жела­тельно применять внутримышечно, при подкожном введении препарата, для обеспе­чения его эффективности необходимо значительно увеличивать дозу вакцины. Что касается вакцин из других штаммов, то необходимы сравнительные исследования для выяснения оптимального метода введения препарата.

С положительным результатом апробирован аэрозольный метод вакцинации цыплят в суточном возрасте в специально оборудованных камерах.

Апробирована, но распространения не получила схема двукратной вакцинации против БМ в суточном, а затем в 10- или 20-дневном возрасте, либо в суточном и в 7-дневном возрасте.

В некоторых странах достаточно широко внедрен автоматизированный ме­тод введения вакцины в ХАО эмбрионов на 18 сутки инкубации. Вакцинация бивалентной вакциной (FC-126 + SB1) не оказывает отрицательного влияния на выводи­мость цыплят. Выводимость цыплят несколько хуже при иммунизации эмбрионов трехвалентной вакциной (FC-126+SB1+CV988).

Применяется одновременная вакцинация эмбрионов против БМ и болезни Гамборо.

Имеются комбинированные вакцины против БМ и болезни Гамборо, против БМ и ИЛТ.

При использовании большинства вакцин иммунитет развивается на 5 день после иммунизации.

Исследуется возможность подбора вакцин для конкретного или превалирую­щего гаплотипа (группы крови) главного комплекса гистосовместимости, а также изготовление рекомбринантных цитокинов, стимулирующих иммунную защиту без применения вакцин.

, Для повышения иммуногенной активности вакцин иногда рекомендуют добав­лять в разбавитель, непосредственно перед вакцинацией, различные иммуномодуляторы, в том числе тимоген, ганглеин, тимолин. Последний вводится из расчета 50-100 мкг на 1 кг живой массы цыпленка.

Эффективность вакцинации можно повысить включением в нее адьювантов (иммунопотенциаторов). Также есть сведения, что увеличение объема вводимой вакцины от 50 до 100 мкл может способствовать повышению эффективности вакцинации.

Проводятся исследования по выведению новых генетически устойчивых к ви­русу БМ цыплят и даже считается, что такой путь борьбы с БМ более эффективен, чем разработка и применение новых вакцин.

Неудовлетворительные результаты при использовании вакцин против БМ могут быть обусловлены: нарушением правил хранения препарата; неправильной подготов­кой вакцины к применению; невыполнением требований к хранению разведенной вак­цины при повышенной температуре окружающей среды; неправильной техникой инъ­екции вакцины; недостаточным содержанием вируса в прививочной дозе; действием на вакцинируемых цыплят различных иммунодепрессивных факторов (стрессы, микотоксины, аденовирусная инфекция, болезнь Гамборо, вирусная анемия цыплят и другие); наличием у цыплят высокого уровня материнских антител, гомологичных вакцинному штамму; проникновением в хозяйство высоковирулентного эпизоотиче­ского штамма вируса БМ; усилением патогенных свойств персистирующего в популяции штамма вируса БМ за счет пассажирования на большом количестве восприимчи­вых цыплят, имеющих низкий уровень активных антител к вирусу БМ.

С целью контроля возможных потерь вакцины при нарушении техники инъек­ции в готовую для применения вакцину иногда добавляют нейтральный краситель. Это позволяет сразу после вакцинации быстро определить полноту и правильность введения вакцины.

Для предупреждения экзогенной контаминации вакцин патогенными микроорга­низмами необходимо использовать стерильные шприцы, трубки и инъекционные иглы. Можно вводить в разбавитель вакцины антибиотики широкого спектра дейст­вия, не препятствующие выработке иммунитета (комбинация натриевой соли пени­циллина 2-5 мг/цыпленка и сульфата стрептомицина 2-5 мг/цыпленка). Некото­рые другие антибиотики, в том числе гентамицин, могут значительно снизить титр вакцины. Во избежание травм необходимо регулярно проводить контроль всех частей оборудования во время его использования, профилактировать возможные про­течки в системе подачи вакцин, следить за положением иглы и правильно вводить иглу цыпленку, не допускать при инъекции потерь вакцины, что контролируется до­бавлением в разбавитель нейтральных красителей.

В содержимом ампул с вакциной имеется консервант диметилсулъфаксид (DMSO), обладающий цитотоксичностъю. Чтоб избежать гибели вируса инфицированных клеток, размораживание содержимого ампул необходимо проводить быст­ро, в теплой воде (27°С) и сразу после ее размораживания добавлять разбавитель и использовать для вакцинации цыплят в максимально короткие сроки.


Источник: http://ptica-ru.ru/veterinarija/bolezni-pticy/1597-mareka.html


Изготовление клеток для кур бройлеров

Изготовление клеток для кур бройлеров

Изготовление клеток для кур бройлеров

Изготовление клеток для кур бройлеров

Изготовление клеток для кур бройлеров

Изготовление клеток для кур бройлеров

Изготовление клеток для кур бройлеров

Изготовление клеток для кур бройлеров