Изготовление клеток для кур бройлеров

Болезнь Марека

Болезнь Марека (нейролимфаматоз, паралич птиц, энзоотический энцефаломие­лит, БМ) — высококонтагиозная вирусная болезнь кур и индеек, сопровождающая­ся образованием лимфоидных опухолей в различных органах и тканях, поражением седалищных нервов, пояснично-крестцовых и плечевых сплетений, реже блуждаю­щего, симпатических и межреберных нервов, сероватым окрашиванием радужной оболочки и деформацией зрачка. Первые сведения о болезни были опубликованы венгерским ученым Мареком Дж. в 1907 году.

Экономический ущерб от заболевания обусловлен повышенным отходом птиц, снижением их продуктивности, дополнительными расходами на ветеринарно-санитарные мероприятия. Считается, что курица, контаминированная вирусом Болезни Марека , за период яйцекладки недодает 16-10 яиц. Больная птица до гибели успевает снести 50, максимум 110 яиц.

Этиология. Возбудитель заболевания ДНК-содержащий вирус, относящийся к подсемейству Gammaherpesviridae, семейства Herpesviridae, куда входит герпесвирус беличьих и паукообразных обезьян. Величина зрелых вирусных частиц (вирионов) 130-150 нм в диаметре. Они состоят из содержащего ДНК нуклеотида величиной 60-90 нм, окруженного белковой оболочкой (капсидом), объединенных в структуру называемую нуклеокапсидом и имеющую диаметр 85-100 нм. Нуклеокапсид окружен наружной суперкапсидной оболочкой, имеет форму икосаэдра, обладает кубическим типом симметрии. Капсид образован 162 полыми капсомерами, имеющими форму ци­линдра. Длина капсомеров 9-12 нм, ширина 8 нм, расстояние между центрами капсомеров 13 нм. Диаметр полости капсомера 3 нм.

Вирус болезни Марека, особенно клеточносвязанный, устойчив во внешней среде и может не терять жизнеспособности, находясь в помете, на поверхности инфицированных яиц, в эпителии перьевых фолликулов 200-300 дней. В инфицированной подстил­ке, при комнатной температуре вирус болезни Марека сохраняет патогенные свойства более 16 недель.

В органах цыплят антиген вируса БМ методом ИФА можно выявить в сыворот­ке крови через 72 часа после заражения, в селезенке через 7 дней, в почках и печени через 14 дней, в коже, периферических нервах, сердце, легких и перьевых фоллику­лах через 21 день, в головном мозге через 35 дней, в мышечной ткани через 63 дня. Указанным методом вирус можно определить в организме цыплят в течение 4-5 ме­сяцев после заражения.

Вирус БМ в организме птиц персистирует главным образом в Т-лимфоцитах. Лимфомы при Болезни Марека Т-клеточного происхождения, в отличие от В-клеточных лимфом лейкоза и ретикулоэндотелиоза, что позволяет их дифференцировать с помо­щью иммуноцитохимических методов с использованием анти Т-В-моноклональных антител.

В лабораторных условиях вирус культивируется в куриных эмбрионах, культу­ре клеток фибробластов и почек куриных, перепелиных, индюшиных и утиных эм­брионов, а некоторые штаммы в первичной культуре клеток почек хомяка и морской свинки.

Из 6 выявленных у вируса болезни Марека антигенов наиболее важны А, В и С антигены. Наличие А-антигена характерно для всех эпизоотических штаммов. В оболочке кле­ток, формирующих лимфому, выявлен специфический опухолевый антиген.

Патогенные штаммы вируса считаются родственными в антигенном отношении.

В организме птиц вирус болезни Марека индуцирует выработку специфических преципитирующих и нейтрализующих вирус антител. Гемагглютинирующими свойствами ви­рус не обладает.

Выделенные вирусы болезни Марека подразделены на 3 серотипа:

1  серотип объединяет патогенные (или онкогенные) вирусы болезни Марека и аттенуированные штаммы этих вирусов;

2  серотип включает естественно аттенуированные штаммы вируса БМ;

3   серотип — герпес вирус индеек.

Для серотипирования новых штаммов вируса БМ наиболее эффективен флуо­ресцентный метод с использованием моноклональных антител, специфичных к суще­ствующим серотипам.

С момента первой регистрации БМ и до 50-х годов, в период, совпадающий с на­чалом широкого изучения болезни 1940-1960 гг. вспышки БМ были спорадически­ми, болезнь протекала в легкой, «классической» форме, в основном с поражениями нервов, нервных стволов и их сплетений. Во второй половине 60-х годов стали выде­лять вирулентные штаммы вируса БМ, которые, наряду с поражениями нервной сис­темы, вызывали образования лимфом во внутренних органах. Такой вариант прояв­ления болезни Марека стали называть «острой формой БМ», смертность птиц достигала 60% среди кур яичного направления и до 10% у бройлеров. Острую форму БМ, вызывае­мую вирулентными штаммами, успешно профилактировали вакциной из штамма HVT (герпес вируса индеек). В конце 70-х годов потери от БМ среди вакцинирован­ных птиц стали возрастать, что было обусловлено появлением высоковирулентных штаммов вируса БМ. Была разработана и позволила стабилизировать обстановку би­валентная вакцина из штаммов SB-1 и HVT(FC-126). В начале 90-х годов снова ста­ли возрастать потери от БМ среди вакцинированных птиц. Несколько улучшить эпи­зоотическую ситуацию в те годы удалось с помощью вакцины из штаммов 1 серотипа CVI 1988 («Rispens»).

Вирус болезни Марека встречается повсеместно среди птиц как яичного, так и мясного на­правления и полное искоренение болезни практически невозможно, потому что ви­рус постоянно персистирует в цыплятах, очень устойчив во внешней среде и легко передается восприимчивым птицам. Применение вакцин — достаточно эффективное средство борьбы с болезнью Марека, но использование живых вакцин может способствовать воз­никновению более вирулентных штаммов вируса БМ. Повышение вирулентности вируса болезни Марека основано на конкуренции двух штаммов вируса (вакцинного и полевого) за одну клеточную мишень. Заражение полевым штаммом вируса БМ цыплят пред­шествует развитию поствакцинального иммунитета. В такой ситуации внутри орга­низма полевой штамм вируса подвергается интенсивному воздействию иммунной системы. В результате такого взаимодействия появляются высоковирулентные фор­мы вируса БМ. Существует прямая зависимость между применением новых вакцин и возникновением новых высоковирулентных штаммов вируса БМ. При существую­щей системе профилактики БМ живыми вакцинами, основываясь на эпизоотологи­ческой истории развития БМ, можно предположить, что прогрессирование виру­лентности полевых штаммов вируса БМ будет продолжаться и в дальнейшем.

В последние годы изолированы участки генома цыплят, ответственные за рези­стентность к болезни Марека. Идентификацией вовлекаемых в патологию генов и определением механизма их действия можно определить значимость врожденного и приобретенно­го иммунных ответов в сдерживании реализации вирулентных свойств вируса болезни Марека.

Маркеры, распознанные таким образом, в будущем можно использовать для селек­ции и выведения пород птиц устойчивых к болезни Марека.

Эпизоотология. Наиболее чувствительны к заражению вирусом БМ цыплята сразу после вывода. С возрастом устойчивость птиц к инфекции повышается. Вос­приимчивыми к заражению вирусом БМ считаются индейки, перепела, фазаны, це­сарки, утки, лебеди, куропатки и некоторые другие виды птиц, которые могут быть вирусоносителями и источником инфекции. В естественных условиях вирус выделен от индеек, перепелов, ворон, хохлатой майны и других птиц. Серологическими ис­следованиями антитела к вирусу герпеса индеек устанавливают в сыворотке крови уток и индеек у 50-72% исследованных птиц, антитела к вирусу БМ у 21% обследо­ванных голубей. У млекопитающих животных, в том числе у КРС, лошадей, овец, белых крыс, морских свиной носительство вируса БМ не отмечено.

Источником инфекции являются больные и переболевшие птицы. Последние в течение 16-14 месяцев после заражения (и не исключено, что пожизненно) явля­ются вирусоносителями. В неблагополучных по болезни Марека хозяйствах количество птиц вирусоносителей может составлять 10-98%. В природных условиях количество вирусо- носителей иногда достигает 60-70% от числа обследованных птиц. Основной путь передачи возбудителя: аэрогенный, с частицами пыли, содержащими эпителиаль­ные клетки перьевых фолликулов, в которых находится вирус. Способность вируса сохраняться на поверхности яиц часто становится причиной перезаражения цыплят в инкубаторе. Допускается возможность передачи вируса с продуктами убоя птиц. Возможен перенос вируса БМ клещами из рода Argas Persicus и жуком-жернотелкой. Наиболее чувствительны к заражению цыплята первых дней жизни, особенно породы леггорн, белый плимутрок, хайсекс белый линии Д. Птицы породы корниш и коричневый леггорн считаются более устойчивыми.

Среди индеек, во Франции и Израиле, были вспышки БМ с формированием лимфоидных опухолей во внутренних органах. В США в промышленных стадах ин­деек подобная случаи не отмечены. Вирус БМ, изолированный при вспышках болез­ни среди индеек, не встречается среди цыплят. Но предполагается, что высоковиру­лентный вирус БМ, выделенный от индеек, все-таки передается им от цыплят, но при этом формируется новый высоковирулентный рекомбинантный штамм.

Быстрому распространению инфекции способствует высокая концентрация птиц, особенно при клеточном содержании.

Клинические признаки. Развитие инфекции у цыплят при болезни Марека подразделяется на три типа. При первом вирус проходит полный репродуктивный цикл развития в эпителии перьевых фолликулов цыплят, с образованием вирусной суперкапсидной оболочки и формированием вирулентного вириона. Неполный цикл развития вируса отмечается в некоторых лимфоидных и эпителиоидных клетках цыплят, а также в культурах клеток. При этом формируется неполноценный, без суперкапсидной оболочки, вирион (антиген), который не является инфекционным.

Второй тип представляет латентная инфекция, преобладающая в Т-клетках, при ко­торой вирусный геном не экспрессируется, Предполагается, что латентная инфекция при болезни Марека является причиной образования опухолей во внутренних органах цыплят.

Третьим типом является трансформированная инфекция, которая встречается только в Т-лимфоцитах, а возбудителем бывает исключительно вирулентный штамм вируса БМ. При трансформированной инфекции происходит ограниченная экспрес­сия генома вируса БМ. Зараженные вирусом БМ цыплята в дальнейшем становятся вирусоносителями и вирусовыделителями (источником инфекции).

Клиническое проявление БМ у цыплят зависит от формы заболевания. Различа­ют «классическую» и острую формы болезни. Классической форме характерны по­ражения периферической и центральной нервной систем с многообразием возмож­ных симптомов, в зависимости от того, какой нерв поражен. Может наблюдаться хромота, пареза и параличи конечностей, хвоста, шеи. Встречается изменение фор­мы и размеров зрачка, цвета радужной оболочки («сероглазие»). Смертность при классической форме составляет 3-7%, но может достигать 30%. Повышенный отход птиц наблюдается в 3-5-месячном возрасте. В случае преобладания поражения орга­нов зрения смертность менее выражена, но значительны потери от снижения продук­тивности птиц.

Острая форма БМ сопровождается образованием лимфоидных опухолей в различных органах и тканях. Продолжительность инкубационного периода от 2 недель до 2-5 месяцев. Симптомы поражения нервной системы при острой форме встречаются редко, но у цыплят 1-2-месячного возраста возможно массовое, крат­ковременное проявление «нервных» признаков заболевания в виде парезов и пара­личей, встречающихся в начальной стадии болезни. При этом в течение 5-7 дней переболевает большинство цыплят, затем признаки поражения нервной системы не проявляются. Через 3-6 недель после этого значительно возрастает отход птиц с преобладанием опухолевых поражений внутренних органов. Острая форма про­является у птиц 4-12-недельного возраста, но возможны вспышки заболевания у 33-70-недельных птиц.

Реже у цыплят встречается типичная «кожная» форма БМ с поражениями перьевых фолликулов и формированием в коже опухолей. Кожная форма может со­путствовать как острому, так и хроническому течению болезни.

У индеек в начале болезни отмечается неспецифичные симптомы в виде: сниже­ния живой массы, вплоть до истощения, дегидратации (сухости кожи), диареи, в не­которых случаях хромоты и параличей. В некоторых популяциях в возрасте между 12 и 30 неделями клиническое проявление БМ и смертность индеек достигают 80-100%.

Вирус БМ у птиц первоначально поражает В-лимфоциты, секретирующие ан­титела, а затем подавляется функция иммунорегуляторов и Т-киллеров. На ранней, острой стадии болезни отмечается лизис и гибель инфицированных Т- и В- лимфоци­тов и развивается иммунодепрессия. Некоторые, высоковирулентные штаммы почти полностью разрушают лимфоидную ткань тимуса, вызывая гибель 25% птиц в течение 2 недель болезни. Обычно, в среднем через неделю после начала развития инфек­ции, болезнь переходит в латентную стадию, вирус персистирует в Т-лимфоцитах в те­чение всей жизни птицы. Иногда происходит злокачественная трансформация Т-лимфоцитов, что завершается развитием невральных поражений с признаками параличей, что соответствует «классической» форме БМ или формируются лимфомы во внутрен­них органах, в том числе в яичниках и семенниках, надпочечниках, почках. С другой стороны, предполагают, что онкогенные штаммы вируса БМ инициируют злокачественную трансформацию некоторых Т-клеток до наступления латентного периода бо­лезни. В дальнейшем эти Т-клетки нечувствительны к регулирующему влиянию им­мунной системы. В лимфомах преобладают Т-хелперы, экспрессирующие на своей поверхности гликопротеин CD4. Материнские антитела значительно защищают цып­лят от полевого вируса БМ, давая возможность иммунной системе цыпленка активи­зировать клеточный иммунный ответ. Но при высоком уровне родительских антител имеется возможность нейтрализации ими не только полевого, но и вакцинного штам­ма вируса БМ. Считается, что при БМ наибольшее значение имеет клеточный имму­нитет, который снижает способность вируса к распространению, способствует удер­живанию инфекции в латентной стадии. С помощью клеточного иммунитета происходит распознавание и разрушение клеток, активированных вирусом БМ, а так­же распознавание и разрушение любых трансформированных вирусом предопухолевых клеток. Клеточный иммунитет подразделяют на «врожденный» и «приобретен­ный». В начале развития болезни наиболее важны факторы врожденного иммунитета макрофаги и NK-клетки (естественные киллеры). Для проявления активности факто­ров приобретенного иммунитета необходимо несколько дней. NK-клетки имеют боль­шое значение у линий цыплят, генетически устойчивых к БМ, у которых развитие лимфом происходит только при заражении высоко вирулентными штаммами вируса БМ. При заражении вирусом БМ генетически устойчивых цыплят активность NI< сильно возрастает, в противоположность — при заражении тем же вирусом цыплят чувствительных к БМ активность NK резко снижается. При реализации клеточного иммунитета цитотоксические Т-лимфоциты вызывают гибель инфицированных кле­ток, Т-хелперы оказывают свое действие при непосредственном контакте или по­средством цитокинов, способных подавлять внутриклеточные формы возбудителя и а также активизировать цитотоксические лимфоциты и механизмы врожденного иммунитета. Активизацией различных цитокинов Т-клетки способны усиливать антителопродукцию В-лимфоцитами. Как при БМ, так и при вакцинации в формирование иммуннного ответа вовлекаются как цитотоксические лимфоциты, так и Т-хелперы. Цитотоксические лимфоциты особенно важны для снижения ранней литической ин­фекции, а также для разрушения клеток реактивированных вирусом БМ. Цитокины Т-хелперов необходимы для сдерживания инфекции в латентной стадии. Одним из та­ких цитокинов является интерферон-q, имеется еще подобный, но пока не идентифи­цированный цитокин, получивший наименование «фактор, сдерживающий инфек­цию в латентной форме».

Существуют и многие другие механизмы реализации иммунной защиты при БМ.

Патоморфология. Патологоанатомические изменения при классической форме проявляются очаговыми или диффузными утолщениями плечевого и пояснично-крестцового нервных сплетений, нервных стволов, седалищных нервов. Последние мо­гут быть утолщены в 1,5-3 раза, изредка с наличием одиночных или множественных узелков различной величины, которые иногда в 3-4 раза толще самого нерва. Окра­ска нервов бывает серой или серовато-желтой, а сами нервы местами размягчены. Частота обнаружения опухолей во внутренних органах при классической форме не­значительна. При гистологическом исследовании нервов отмечается отек, дегенера­ция нервных волокон и миелиновой оболочки, размножение швановской оболочки, распад нервных волокон, очаговая или диффузная инфильтрация нервов лимфоидными клетками, среди которых могут встречаться плазматические клетки и другие. В зависимости от клеточного состава инфильтрата различают изменения воспали­тельного либо неопластического характера, но, видимо, сосуществуют оба типа пора­жения нервов, а степень их проявления зависит от стадии При гистологическом исследовании опухолевых образований находят неопла­стические, воспалительные и иммунологически активные клетки, в том числе лимфо­циты, плазматические клетки и гистиоциты, Т- и В- клетки с превалированием по­следних. Преобладают мелкие лимфоидные клетки с компактным ядром и узкой полосой цитоплазмы. Неоплазмы начинают формироваться в периваскулярной тка­ни различных органов. Появляются небольшие пролифераты из примитивных кле­ток. Затем они дифференцируются в лимфоидные, гистоцитарные и плазматические клетки. Очаги из новообразованных клеток увеличиваются в размере, сливаются в обширные участки, а паренхима и строма органов постепенно замещается опухоле­выми клетками. Степень поражения может быть такова, что в органе под микроско­пом можно выявить лишь отдельные характерные органу структуры или таковые во­все не сохраняются.

Клеточный состав опухолевой ткани зависит от степени дифференцировки опу­холевых клеток. Поэтому иногда принято различать три типа лимфом:

—  лимфатические лимфомы, состоящие преимущественно из лимфоцитов малой, а также средней и крупной величины (лимфобластов), при этом опухолевая ткань мо­жет быть сформирована в основном из одного вида указанных лимфоцитов с единич­ными базофильными родоначальными клетками — мономорфный клеточный состав, или состоять из всех указанных клеток — гетероморфный клеточный состав;

—   гистицитарно-плазматические лимфомы, сформированные незрелыми и зре­лыми гистицитами, ретикулярными и плазматическими клетками, среди которых встречаются единичные лимфоциты и фибробластические клетки (гетероморфный клеточный состав);

—   смешанно-клеточные лимфомы, состоящие из лимфатических, гистиоцитарных, плазматических, ретикулярных, гранулоцитарных и фибробластических клеток на различной стадии дифференцировки.

—     Чаще встречаются смешанно-клеточные лимфомы, значительно реже лимфатиче­ские, и совсем редко гистиоцитарно-плазматические.

—     Ранее всего при БМ поражаются тимус и фабрициева сумка. Фабрициева сумка может быть уменьшена в размере или атрофирована, в отдельных случаях в ней встречаются неоплазмы. Лимфоидные фолликулы фабрициевой сумки атрофируют­ся, а на их месте формируются кистозные полости. При этом межфолликулярные соединительнотканные перегородки несколько утолщены и инфильтрированы лимфоидными клетками. В некоторых случаях (от 2 до 10) отмечается развитие в фабрициевой сумке неоплазмы с последующей атрофией характерных органу структур. В начале опухолевые очаги формируются периваскулярно в межфолликулярных соединительнотканных перегородках в одной или в нескольких складках слизистой оболоч­ки. Затем при росте опухолевых очагов лимфоидные фолликулы атрофируются или инфильтрируются опухолевым пролифератом и сливаются (замещаются) неопласти­ческой тканью. Но наиболее частым вариантом изменений в фабрициевой сумке яв­ляется гипоплазия, вплоть до атрофии лимфоидных фолликулов и образование на их месте крупных — в 1,5-3 раза больше размеров непораженных фолликулов — кистозных полостей.

—     Диагностика. Диагноз на БМ ставится с учетом эпизоотологических данных, ре­зультатов вскрытия трупов птиц и гистологических исследований пораженных внутренних органов, ретроспективных серологических исследований, выделении вируса на куриных эмбрионах, в культуре клеток фибробластов эмбрионов кур или на дру­гих чувствительных биологических моделях с последующей идентификацией в РДП, ИФА, МФА, ПЦР или путем электронномикроскопических исследований и поста­новкой биопробы на цыплятах.

При заражении на ХАО 11-12-дневных эмбрионов кур патологическим материа­лом от больных птиц на 7-8 день по всей поверхности хориоаллантоисной «мембраны» появляются очаги клеточной пролиферации («пустулы») диаметром 0,5-3 мм. У эмбрионов также находят поражения печени и спленомегалию.

Антиген вируса БМ в перьевых фолликулах выявляют в прямой реакции МФА или в РДП, что в определенной степени можно использовать для дифференциальной диагностики БМ и лимфоидного лейкоза.

Вирусы лейкоза и ретикулоэндотелиоза птиц в клетках мишенях интегрируют с (с) one геном, что приводит к экспрессии гена с-тус, инициирующего лимфогенные процессы. Эти изменения, происходящие на молекулярном уровне, могут использовать­ся для окончательного или дифференциального диагноза на лейкоз, ретикулоэндотелиоз и БМ на основании определения состава ДНК опухоли. Использование таких проб, как pRAV-2, pSNV, c-myc и анализа гибридизации ДНК опухоли, позволяет выявить клональные включения провирусов вирусов лейкоза и ретикулоэндотелиоза и измене­ния участка с-тус. На основании этого с помощью ПЦР дифференцируют лимфомы БМ, лейкоза и ретикулоэндотелиоза.

Биопробу проводят на суточных цыплятах. Результаты биопробы оценивают че­рез 2 недели по наличию вирусспецифического антигена в перьевых фолликулах и характеру гистологических изменений во внутренних органах; через 4-6 недель — опухолей во внутренних органах и нервах; через 8 недель — выявлении специфиче­ских антител к вирусу БМ.

Вирулентность штамма вируса БМ, выделенного в хозяйстве, устанавливают комплексно, поскольку определить ее только с помощью серологических методик, в том числе на молекулярном уровне, не удается. Степень вирулентности штаммов

—                 серотипа определяют на цыплятах. Для этого Составляется несколько групп из ге­нетически чувствительных и генетически устойчивых к БМ птиц. Цыплят иммунизи­руют вакцинами 1 серотипа (e.g. CVI 988), FC-126 (ВГИ) и FC-126+SB-1 (или 30 1В). Часть групп заражают вновь выделенным штаммом и такое же количе­ство групп штаммом вируса с известной вирулентностью.

У генетически чувствитель­ных цыплят, высоковирулентный вирус (VV) вызывает болезнь в группе цыплят, вакцинированных РС-126(ВГИ), но в группах, вакцинированных CVI 988 или бива­лентной вакциной, БМ не проявляется. Генетически устойчивые цыплята, вакцини­рованные FC-126 (ВГИ), при заражении высоковирулентным штаммом (VV) не за­болевают БМ. Заключение о степени вирулентности выделенного вируса БМ делается по экспериментальному сравнению его вирулентности и вирулентности референс-(УУ) штамма.

Лечение и профилактика. Профилактика БМ основана на строгом соблюдении правил санитарно-гигиенических мероприятий, изолированном выращивании цып­лят от птиц других возрастов, сведении до минимума возможности одновременного заражения цыплят вирусами БМ и лейкозо-саркомной группы.

Для специфической профилактики БМ используют различные вакцины:

1. Живые вакцины из аттенуированных онкогенных штаммов 1 серотипа вируса БМ (штаммы HPRS-B16, Md-5, JV и JA), которые не проходят полный цикл разви­тия в перьевых фолликулах птиц, поэтому нет опасности их реверсии в патогенные варианты. Горизонтально данные штаммы не распространяются.
2. Вакцины из частично аттенуированного вируса БМ 1 серотипа — CVI-988 («Rispens»), который проходит полный цикл репликации в организме цыплят, рас­пространяется во внешней среде и обладает остаточной патогенностью для восприим­чивых птиц.
3. Вакцины из природно-ослабленных (полевых) неонкогенных вирусов БМ

2  серотипа (штаммы SB-1, 301В). Данные вакцинные штаммы хорошо размножают­ся в организме птиц, зрелые формы вирионов выделяются во внешнюю среду и рас­пространяются среди птиц горизонтально.

Вакцины из авирулентного вируса герпеса индеек (ВГИ) 3 серотипа (штаммы FC-126, PBT11V1). Данные вирусы не нуждаются в аттенуации, возможность ревер­сии иатогенности

1. отсутствует. Штамм FC-126 может быть стабилизирован во внекле­точном состоянии, в том числе лиофильно высушен. Но если вакцины из штамма FC-126 готовятся из клеточно не связанного вируса, то они более чувствительны к ро­дительским антителам. В вакцинах, содержащих клеточносвязанный вакцинный ви­рус нейтрализуются родительскими антителами только в присутствии комплемента.
   1. Поливалентные (двух- и трехвалентные) вакцины, изготовленные из различ­ных штаммов вируса БМ и ВГИ, которые бывают эффективны при энзоотических вспышках БМ, обусловленных заражением птиц высоковирулентными полевыми штаммами. Из двухвалентных вакцин, по иммуногенной активности, пока наиболее удачны сочетания штаммов 2 и 3 серотипов, например SB-1 и FC-126 или 301 В/1 и HVT. Меньший уровень синергизма в вакцинах из штаммов 1 и 3 или 1 и 2 сероти­пов. В организме птиц протективный синергизм проявляется в возрастании имунногенной эффективности одного штамма даже при добавлении небольшого количества другого штамма.
   2. Инактивированные вакцины готовятся из цельного вируса без нуклеиновой кислоты, но содержащего протеины-носители антигена вируса БМ. В промышлен­ном птицеводстве признания пока не получили.
   3. Рекомбининтные вирусные вакцины разработаны, апробированы, но массово­го применения пока не находят.

Один из критериев, который надо учитывать при подборе вакцины для конкрет­ного хозяйства — это определение вирулентности циркулирующего в нем вируса БМ. Если в хозяйстве персистирует штамм вируса БМ высоковирулентный + (VV+), то целесообразно применение трехвалентных вакцин, содержащих все 3 серотипа вакцинных штаммов вируса БМ. В остальных случаях можно использовать моно- или бивалентные вакцины.

Эффективность вакцины зависит не только от количества содержащихся в них бляшкообразующих единиц (титр вируса, определяемый в культуре клеток), но и от способности вируса

приживаться в организме цыпленка, потому что только при ус­ловии репликации вируса формируется напряженный клеточный иммунитет против БМ. Для выяснения, реплицируется ли вакцинный вирус в организме цыпленка, на 3-10 день после вакцинации проводят его выделение. Отсутствие вакцинного вируса в изолятах указывает на недостаточную эффективность вакцинации.

При выборе вакцины для хозяйства яичного направления важно знать степень инфицированности цыплят вирусом лейкоза. При обнаружении у птиц вируса лейко­за нежелательно использование в данном хозяйстве вакцин из штаммов 2 серотипа, потому что последний может провоцировать лейкоз. Если птица свободна от вируса лейкоза, то ее можно успешно вакцинировать вакцинами, содержащими штаммы 2 серотипа.

Большинство вакцин против БМ нарабатывается с использованием вакцинного штамма вируса, накопленного в культуре клеток птиц. Были успешные попытки культивирования вакцинных штаммов в органной культуре тканей птиц, в куль­турах клеток млекопитающих, рыб, амфибий, рептилий, но большинство подоб­ных исследований завершилось на экспериментальной стадии.

Вакцины против БМ преимущественно живые, жидкие, хранятся в жидком азо­те. Выпускаются и сухие вакцины из штамма ВГИ. Вакцинируют цыплят сразу по­сле вывода, обычно внутримышечно, значительно реже подкожно. Последний метод введения вакцины, в ряде случаев, не очень эффективен. Вакцину «Rispens» жела­тельно применять внутримышечно, при подкожном введении препарата, для обеспе­чения его эффективности необходимо значительно увеличивать дозу вакцины. Что касается вакцин из других штаммов, то необходимы сравнительные исследования для выяснения оптимального метода введения препарата.

С положительным результатом апробирован аэрозольный метод вакцинации цыплят в суточном возрасте в специально оборудованных камерах.

Апробирована, но распространения не получила схема двукратной вакцинации против БМ в суточном, а затем в 10- или 20-дневном возрасте, либо в суточном и в 7-дневном возрасте.

В некоторых странах достаточно широко внедрен автоматизированный ме­тод введения вакцины в ХАО эмбрионов на 18 сутки инкубации. Вакцинация бивалентной вакциной (FC-126 + SB1) не оказывает отрицательного влияния на выводи­мость цыплят. Выводимость цыплят несколько хуже при иммунизации эмбрионов трехвалентной вакциной (FC-126+SB1+CV988).

Применяется одновременная вакцинация эмбрионов против БМ и болезни Гамборо.

Имеются комбинированные вакцины против БМ и болезни Гамборо, против БМ и ИЛТ.

При использовании большинства вакцин иммунитет развивается на 5 день после иммунизации.

Исследуется возможность подбора вакцин для конкретного или превалирую­щего гаплотипа (группы крови) главного комплекса гистосовместимости, а также изготовление рекомбринантных цитокинов, стимулирующих иммунную защиту без применения вакцин.

, Для повышения иммуногенной активности вакцин иногда рекомендуют добав­лять в разбавитель, непосредственно перед вакцинацией, различные иммуномодуляторы, в том числе тимоген, ганглеин, тимолин. Последний вводится из расчета 50-100 мкг на 1 кг живой массы цыпленка.

Эффективность вакцинации можно повысить включением в нее адьювантов (иммунопотенциаторов). Также есть сведения, что увеличение объема вводимой вакцины от 50 до 100 мкл может способствовать повышению эффективности вакцинации.

Проводятся исследования по выведению новых генетически устойчивых к ви­русу БМ цыплят и даже считается, что такой путь борьбы с БМ более эффективен, чем разработка и применение новых вакцин.

Неудовлетворительные результаты при использовании вакцин против БМ могут быть обусловлены: нарушением правил хранения препарата; неправильной подготов­кой вакцины к применению; невыполнением требований к хранению разведенной вак­цины при повышенной температуре окружающей среды; неправильной техникой инъ­екции вакцины; недостаточным содержанием вируса в прививочной дозе; действием на вакцинируемых цыплят различных иммунодепрессивных факторов (стрессы, микотоксины, аденовирусная инфекция, болезнь Гамборо, вирусная анемия цыплят и другие); наличием у цыплят высокого уровня материнских антител, гомологичных вакцинному штамму; проникновением в хозяйство высоковирулентного эпизоотиче­ского штамма вируса БМ; усилением патогенных свойств персистирующего в популяции штамма вируса БМ за счет пассажирования на большом количестве восприимчи­вых цыплят, имеющих низкий уровень активных антител к вирусу БМ.

С целью контроля возможных потерь вакцины при нарушении техники инъек­ции в готовую для применения вакцину иногда добавляют нейтральный краситель. Это позволяет сразу после вакцинации быстро определить полноту и правильность введения вакцины.

Для предупреждения экзогенной контаминации вакцин патогенными микроорга­низмами необходимо использовать стерильные шприцы, трубки и инъекционные иглы. Можно вводить в разбавитель вакцины антибиотики широкого спектра дейст­вия, не препятствующие выработке иммунитета (комбинация натриевой соли пени­циллина 2-5 мг/цыпленка и сульфата стрептомицина 2-5 мг/цыпленка). Некото­рые другие антибиотики, в том числе гентамицин, могут значительно снизить титр вакцины. Во избежание травм необходимо регулярно проводить контроль всех частей оборудования во время его использования, профилактировать возможные про­течки в системе подачи вакцин, следить за положением иглы и правильно вводить иглу цыпленку, не допускать при инъекции потерь вакцины, что контролируется до­бавлением в разбавитель нейтральных красителей.

В содержимом ампул с вакциной имеется консервант диметилсулъфаксид (DMSO), обладающий цитотоксичностъю. Чтоб избежать гибели вируса инфицированных клеток, размораживание содержимого ампул необходимо проводить быст­ро, в теплой воде (27°С) и сразу после ее размораживания добавлять разбавитель и использовать для вакцинации цыплят в максимально короткие сроки.

Источник: http://ptica-ru.ru/veterinarija/bolezni-pticy/1597-mareka.html